E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elansky
Oomycete Phytophthora infestans (Mont) de Bary způsobuje pozdní plíseň, nebezpečné onemocnění brambor a rajčat. Jeden z hlavních zdrojů primárního inokula P. infestans jsou silnostěnné klidové reprodukční struktury - oospory.
Hybridní oospory vytvořené v důsledku křížení geneticky odlišných rodičovských kmenů přispívají ke zvýšení genotypové rozmanitosti v populaci, v důsledku čehož je urychlen proces adaptace kmenů na nové odrůdy a aplikované fungicidy.
Tvorba oospór P. infestans tato oblast byla zaznamenána v mnoha zemích světa: Rusko (Smirnov et al., 1999), Norsko (Hermansen et al., 2002), Švédsko (Strömberg et al., 2001), Nizozemsko (Kessel et al., 2002) a další regionech. Oospory jsou schopné přetrvávat v půdě v životaschopném stavu po dobu delší než 2 roky (Bødker et al., 2006) a způsobit infekci rostlin po přezimování (Ulanova et al., 2010; Lehtinen et al., 2002).
Dříve se ukázalo, že listy rostlin různých úrovní bramborového keře mají rozdíly v odolnosti proti pozdní plísni; zvyšuje se od spodních listů k horním. Tato tendence nezávisí na věku listů, stáří rostlin nebo odrůdě brambor (Vesper et al., 2003). Současně jsme v literatuře nenašli údaje o rozdílech v intenzitě tvorby oospór v listech různých vrstev bramborového keře. Pokud však takové rozdíly existují, měly by být vzaty v úvahu při odběru vzorků listů pro analýzu tvorby oospór a při interpretaci výsledků získaných jinými autory. Cílem této práce bylo studovat tvorbu oospór v oddělených listech různých vrstev rostliny brambor, umístěných za stejných podmínek ve vlhkých komorách.
Materiály a metody
Použili jsme 5 izolátů P. infestans různé typy páření izolované z postižených vzorků přivezených z oblastí Moskvy, Rjazaně a Leningradu. Z nich byly vybrány 3 páry kmenů různých typů páření, které při testování v agarovém ovesném médiu poskytly bohaté oospory.
Pro testování jsme použili rostliny bez virů z následujících odrůd pěstovaných ve skleníku (v rašelinovém substrátu): brzy Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, středně brzy Ilyinsky, střední sezóna Yanka.
Pro analýzu byly vybrány jednoduché listy z různých úrovní rostliny bramboru. Tři listy byly vybrány ze spodní úrovně (4 spodní složené listy), tři shora (3-4 složené listy nahoře) a tři listy ze středu keře. Jednoduché listy byly zváženy, vyfotografovány na souřadnicovém papíru (pro výpočet objemu a plochy) a poté umístěny vzhůru nohama na povrch sterilní vody, nality 25 ml do Petriho misek. Poté byl každý list infikován jednou kapkou smíšené suspenze izolátů zoosporangia Al a A1 páření. Pro tři listy odebrané z každé úrovně bylo použito inokulum tří různých párů izolátů. Jeden list byl infikován směsí inokula jednoho páru izolátů.
Pro přípravu suspenze zoosporangií byly izoláty různých typů páření pěstovány na agarovém ovesném médiu po dobu 7 dnů, poté byly zoosporangie omyty sterilní destilovanou vodou. Koncentrace inokula byla 5–7 zoospór v zorném poli mikroskopu při 80násobném zvětšení. Každý list byl kontaminován jednou kapkou smíšené suspenze páření typu izolátů zoosporangia izolátů A1 a A2.
Ve všech experimentech byly použity 3 bramborové listy na variantu. Po inkubaci po dobu 20 dnů při 18 ° C byl každý list homogenizován v třecí misce se 2 ml destilované vody. Z výsledné suspenze byly odebrány 3 vzorky, z nichž byly připraveny přípravky pro mikroskopii.
V každé variantě bylo zkoumáno 180 vizuálních polí, poté byl přepočítán počet oospór na 1 mm2 povrch listu. Výsledky počítání pro každou variantu byly zprůměrovány.
Pro výpočet intervalu spolehlivosti (μ) pro hladinu významnosti 0,05 byl použit následující vzorec
kde s je směrodatná odchylka, n je počet měření, t je konstanta t-testu pro hladinu významnosti 0,05. Všechny výpočty byly provedeny v aplikaci Excel (balíček Microsoft Office).
Výsledky a diskuse
Očkování listů shromážděných z různých vrstev bramborového keře a umístěných za stejných podmínek do vlhkých komor odhalilo rozdíly v intenzitě tvorby oospór. U všech studovaných odrůd byl maximální počet oospór vytvořen po naočkování listů shromážděných ze spodní a střední vrstvy keře. Nebyly zjištěny žádné významné rozdíly ve tvorbě oospór ve spodních a středních listech.
Minimální počet oospór byl vytvořen v listech horní vrstvy (obr. 1).
V listech spodní a střední vrstvy byl vytvořen maximální počet oospór v odrůdách Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar a Osiris. Byly vytvořeny poněkud méně intenzivně v listech odrůdy Yanka. Maximální počet oospór v listech horní vrstvy byl pozorován v listech odrůdy Uladar, následované Zorachkou, Osirisem, Yankou, Ilyinským, Sandrinem v sestupném pořadí; ne všechny rozdíly však byly statisticky významné.
Postava: 1. Tvorba oospór v listech různých vrstev bramborového keře. Dolní jsou listy tří spodních úrovní keře, horní jsou 3-4 komplexní listy z horní části rostliny, střední jsou ze středu keře.
Chybové pruhy ukazují interval spolehlivosti pro hladinu významnosti 0,05.
V terénu přispívají mikroklimatické podmínky také k tvorbě oporosp ve spodních a středních listech keře: vyšší vlhkost, snížené sluneční sluneční záření a denní výkyvy teploty (Harrison, 1992). Horní postřik má za následek méně pesticidů ve spodní části a středu keře. Ke snížení tvorby oospór by měly být použity technologie, které umožňují úspěšné dodávání fungicidů do spodní a střední části keře. Dobré výsledky lze dosáhnout použitím turbulentních vzduchových postřikovačů a systémových fungicidů, které se mohou šířit do neošetřených částí pouzdra.
Tato práce byla podpořena Ruskou vědeckou nadací (projekt č. 14-50-00029).
Článek byl publikován v časopise „Potato Protection“ (č. 2, 2015)